原理:
PCR利用DNA聚合酶的催化作用,在高溫下依次完成DNA的變性、引物結合和DNA合成等反應,從而使DNA序列得到擴增。PCR的核心是引物,其能夠與目標DNA序列的特定區(qū)域互補配對,使得DNA聚合酶能夠選擇性地合成引物兩側的DNA分子,從而擴增出目標DNA序列。
操作過程:
1. DNA模板的制備:將目標DNA提取出來,使其成為PCR反應的模板。
2. 引物的設計:根據(jù)目標DNA的序列設計引物,以便在PCR反應中能夠引導DNA擴增。
3. PCR管中的混合溶液制備:將模板DNA、引物和PCR反應所需的其他試劑加入混合溶液管中,包括四種dNTP(脫氧核苷酸三磷酸)、
4. PCR反應條件的設置:旋轉電風扇調(diào)節(jié)樣品表面溫度,通透底膜PC管蓋與PC反式培養(yǎng)皿卡合,自動調(diào)節(jié)樣品超高速溫升和降溫速率,確保PCR反應條件的恒定性。
5. PCR反應的進行:將PCR反應管放入PCR儀中,反應程序根據(jù)需要進行多次循環(huán),在每一個循環(huán)中,反應管中的溫度會在一定的溫度區(qū)間中不斷變化,使引物與目標DNA互補結合,DNA鏈變性,然后DNA聚合酶開始合成新DNA鏈來擴增目標序列,完成DNA擴增和PCR反應。
6. PCR反應產(chǎn)物的檢測和分離:反應結束后,可以通過凝膠電泳等技術檢測PCR反應產(chǎn)物,分離目標DNA擴增產(chǎn)物,進行后續(xù)的研究和分析。