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如何調(diào)配MEM培養(yǎng)基?小編告訴你
  • 發(fā)布日期:2020-04-16      瀏覽次數(shù):1251
    •   MEM培養(yǎng)基是動物細(xì)胞培養(yǎng)中的常用的培養(yǎng)基,主要是貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),修改配方后也可用于其他類型細(xì)胞培養(yǎng),例如如無鈣(Ca)MEM培養(yǎng)基可被用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),而MEM培養(yǎng)基可被用于二倍體細(xì)胞的培養(yǎng)。
        配方
        1.配置前準(zhǔn)備:配置培養(yǎng)基新制備的milli water。調(diào)節(jié)pH值的酸堿溶液也應(yīng)該使用這種水配置。制備培養(yǎng)基的器皿清洗干凈,并用milli water潤洗兩次。
        2.溶解培養(yǎng)基:取5%終體積的milli water,加入到1L玻璃杯中,將干粉培養(yǎng)基倒入燒杯,水洗包裝袋內(nèi)面兩次,倒入培養(yǎng)液中。磁力攪拌助溶。
        3.補加試劑:根據(jù)包裝袋說明加入NaHCO3(2.2g),HEPES(2.383,10mmol)、非必需氨基酸(可不加,10ml)。
        4.加抗生素:一般抗生素終濃度--青霉素100U/ml,鏈霉素100U/ml。1L加入10m儲備液。
        5.調(diào)pH值:加水到1000ml,然后用HCL或者NaOH調(diào)節(jié)pH到7.2。
        6.過濾除菌:采用0.22um濾膜。過濾后分裝于小瓶中(100或200ml)。過濾后pH值一般上升0.1-0.3。
        7.加小牛血清:根據(jù)MEM培養(yǎng)基配置的量將小牛血清分裝,冷凍保存(-20度)。臨用前將加入小牛血清10%。
        使用說明
        1、保存在2-8度干燥環(huán)境,避光。
        2、稱量出比終容積小5%的蒸餾水,混合的容器盡可能接近終容積。
        3、將干粉加入到室溫15到30度的水中,輕柔攪拌,勿用熱水。
        4、沖洗出包裝袋內(nèi)所有干粉。
        5、每升培養(yǎng)基加入2.2g碳酸氫鈉。
        6、用水稀釋至終的容積,攪拌直至溶解。不要過分混合。
        7、調(diào)整pH值比后的培養(yǎng)用的pH值要低0.2到0.3(過濾后pH值一般要升高0.1 到0.3):用1N NaOH 和 1N HCl,邊攪拌邊緩慢添加。調(diào)整pH值完畢后,封閉容器,直至過濾。
        8、立即用膜濾過消毒。
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